柱上衍生（on-column derivatization），理学-化学-分析化学-色谱法-薄层层析-停流技术，将样品与衍生试剂依次或以“三明治”模式注入分析系统，基于两者在分离系统中的移动速度不一致，使两者在分离系统中接触并发生反应的分析方法。原理在色谱分析中，由于分离或检测需要常需对样品进行衍生化，即通过样品与衍生化试剂间的化学反应，使反应产物适应分离模式对样品的要求或与特殊检测器匹配。例如，强极性、高沸点、低挥发性样品需经衍生化后才能采用气相色谱进行分析。荧光检测只对发荧光的物质有响应，具有强选择性，而已知物质中只有少部分物质具有自然荧光，因此大部分情况下使用荧光检测器，需要使用荧光试剂对分析物进行衍生化。常用的衍生方法有柱前、柱上及柱后衍生法。柱上衍生是通过将样品与衍生试剂同时引入色谱柱，提供一定的温度和溶剂条件，使其在柱上发生反应，反应过程与分离过程同时进行。柱上衍生用于某些方法中可简化样品前处理，使得整个分析过程连贯而有序。柱上衍生法中分离和衍生过程同时发生，因此需要优化分离缓冲液，使其同时满足分离和衍生的要求。