多重替代扩增(multiple displacement amplification; MDA),理学-生物学-生物工程-生物技术-生物技术-基因组工程,以环状滚动扩增方法为基础发展而来的链置换扩增技术。属于全基因组扩增方法。不同于传统聚合酶链反应(PCR)的等温DNA扩增技术,主要依赖于Φ29 DNA聚合酶。原理利用Φ29 DNA聚合酶和六聚体随机引物对模板DNA进行扩增。硫代磷酸修饰的六聚体随机引物能抑制聚合酶的外切核酸酶活性,可在多个位点与模板DNA进行退火结合。在30℃恒温扩增过程中,Φ29 DNA聚合酶在多个位点同时起始复制,取代模板的互补链,被置换出的互补链又成为模板来继续进行扩增,形成级联放大系统,最终可以生成大量高保真的DNA。Φ29 DNA聚合酶的优势:①具有3′-5′外切酶活性,错误率仅为1.0×10-6~1.0×10-7,大约是Taq DNA聚合酶错误率的1/100,因此可以得到高保真的扩增产物。②具有在30℃恒温条件下高效连续合成的特性,能连续扩增70000个碱基而不从模板上解离,平均产物长度>10千碱基。