无痕标签

无痕标签（traceless tag），理学-化学-化学生物学-化学生物学技术-生物分离技术-亲和标签-无痕迹标签，在蛋白质纯化过程后酶切去除融合标签，在最终的目标蛋白上无多余氨基酸残留的技术。原理经典的分子克隆方法需要依赖连接酶来实现载体和片段的连接，插入片段需经过限制性内切核酸酶（NdeⅠ、NcoⅠ、BsaⅠ、BamHⅠ、PstⅠ）处理才能除去，而该过程受到序列中原有酶切位点的限制。后续还要经过连接酶连接，操作复杂，也会带来载体自连背景，纯化时酶切去除标签的过程会导致目标蛋白上“疤痕”的存在。在设计无痕标签的过程中，采用不依赖连接反应的克隆（ligation independent cloning; LIC）方法引入标签，可以节省成本和时间。在连接片段和载体的过程中，通过适当引物的设计，可在去除融合标签后得到无氨基酸残留的目标蛋白序列。经过改造的质粒含有组氨酸标签（6xHis tag），并且对N端TEV蛋白酶断裂位点（TEV site）无过多限制，通过LIC方法将目的基因片段和载体连接之后，可以保证切除融合标签的过程中无“疤痕”残留（右图）。